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qiagen外泌體分離純化試劑盒exoEasy Maxi Kit

exoEasy Maxi Kit使用了膜親和離心柱來高效地從血漿、血清、細胞培養上清及其他生物液體中提取獲得exosome及其他細胞外囊泡。Maxi規格的離心柱可允許處理大體積的樣品，包括高達4 ml的血漿或血清，或者32 ml的細胞培養上清。實驗流程非?？焖?，非常適用于提取EV進行exosome及其他細胞外囊泡的功能性分析。

qiagen外泌體分離純化試劑盒exoEasy Maxi Kit

exoEasy Maxi Kit - 25分鐘內完成外泌小體純化。

exoEasy Maxi Kit可從預過濾的血清、血漿或細胞培養上清中在25分鐘內提取獲得細胞外囊泡。洗脫下來的囊泡可即用于物理或生化性質分析，或可進行緩沖液交換及濃縮，可使用如超濾技術等方法。

Performance

用于純化外泌小體及其他細胞外囊泡的exoEasy實驗方案不僅比超速離心更加快捷，而且可獲得更潔凈的純化產物。掃描電子顯微鏡顯示兩種技術均可提供完整的預期尺寸的囊泡，不過通過超速離心法制得的樣品中還含有一些并不符合EV尺寸或外形的更小的結構。 

提取獲得的囊泡具有完整的功能，可用于多種下游應用，包括細胞培養等工作。洗脫的囊泡的性質和數量可通過多種不同的方法進行測定。其中包括電子顯微鏡、物理特征描述（例如，納米顆粒追蹤分析（NTA），或可調電阻脈沖感應（TRPS））、微粒分子成分分析（例如蛋白質、核酸或脂類）等。由于如NTA或TRPS等微粒計數方法無法將囊泡與其他懸浮顆粒區分開，使用未經處理的生物液體或仍含有其他顆粒物（例如，蛋白復合物）的粗制備樣品進行顆粒計數可能會明顯地高估囊泡數目。

Principle

exoEasy Kit在傳統的超速離心exosome或微泡提取方法的基礎上進行了改進，可在25分鐘內獲得純化的細胞外囊泡。
  
exoEasy Maxi Kit使用了膜親和結合步驟來從血漿、及血清或細胞培養上清中分離exosome及其他EV。這種方法無法通過大小或細胞來源對EV進行區分，也不依賴于是否存在微粒表位。它運用了囊泡的通用生化特性來提取樣品中的所有細胞外囊泡（參見圖片使用NTA對由exoEasy Maxi Kit提取獲得的細胞外囊泡進行性質分析）。因此，必須*去除細胞、細胞碎片、凋亡小體等組分，可在開始提取步驟前對樣品進行離心或過濾等操作。 

Exosome Diagnostics, Inc.開發的技術使用了離心柱及專門的緩沖液來從預過濾的生物液體中純化exosome；可處理高達4 ml的血漿或血清。對于細胞培養上清，經試驗驗證可從高達32 ml的樣品中成功提取外泌小體（4次離心柱上樣步驟）。不過，上清中的囊泡濃度非常依賴于細胞類型及培養條件；因此我們建議，對于未經過該試劑盒測試樣品材料，起始上清體積不要超過16 ml。更高的樣品體積可能導致囊泡的回收率降低。實驗流程非?？焖?，非常適用于exosome及其他細胞外囊泡的功能性分析。除囊泡之外的懸浮顆粒絕大部分可在結合及清洗步驟中被去除，這種顆粒包括了大體積的蛋白復合物，其在血漿及血清中含量很高。

Procedure

提取細胞外囊泡的總流程僅需要25分鐘。將預先過濾過的血漿、血清或細胞培養上清（去除了尺寸大于0.8 μm的顆粒）與Buffer XBP進行混合并結合在exoEasy膜親和離心柱上。對結合的外泌小體使用Buffer XWP進行清洗，并隨后使用400 µl Buffer XE（主要含無機鹽的水緩沖液）進行洗脫，隨后即可用于物理或生化分析。對于特定應用，如生物檢測等，可能需要進行額外的濃縮或緩沖液置換步驟。此步驟可通過孔徑尺寸為100 kDa或更小的超濾方法來實現。

Applications

exoEasy Kit非常適合于從血漿、血清、細胞培養上清及其他生物液體中提取微囊泡。提取獲得的囊泡可用于如下應用進行分析：

• 物理性質分析（例如，NTA，TRPS） 
• 電子顯微鏡
• 提取并分析DNA、RNA*、蛋白質、脂類及其他成分
• 流式細胞術
• 抗體或熒光染料標記
• 受體細胞的攝取 

*如需提取囊泡RNA，我們推薦使用exoRNeasy試劑盒。

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